產品概述：

GenRec Assembly Master Mix Kit是一款簡單、快速、高效的多片段DNA定向克隆產品，本試劑盒可以將PCR產物定向克隆至任意載體的任意位點。做法是：將載體在克隆位點進行線性化，并在插入片段PCR引物5'端引入線性化克隆載體末端序列，使得插入片段PCR產物5'和3'最末端分別帶有和線性化克隆載體兩末端對應的完全一致的序列(20 bp～40 bp)。將這種兩端帶有載體末端序列的PCR產物和線性化克隆載體按一定比例混合，在重組酶的催化下，僅需反應15-60 min即可進行轉化，完成定向克隆?？寺￡栃月士蛇_90%以上。 試劑盒中2×GenRec Assembly Master Mix預混了重組酶和重組反應所需緩沖液，并添加了特殊成分，可顯著提高重組克隆效率，可以一次實現多至3-6個片段的順序拼接克隆。

特點：

應用范圍：

單片段重組流程概覽

圖一：使用2×GenRec Assembly Master Mix將一個基因片段克隆到目標載體，實驗需要基因片段和線性化載體。該線性化載體可以通過限制性內切酶酶切載體獲得，或者用反向PCR擴增環狀載體獲得。插入片段由PCR擴增獲得，所用的兩條引物在5'端添加線性化克隆載體末端序列（圖中用綠色和橙色標記），這樣獲得的PCR產物5'末端和3'末端的序列和線性化載體末端的序列完全一致。

多片段重組流程概覽

圖二，使用2×GenRec Assembly Master Mix將四個基因片段克隆到目標載體。 該線性化載體可以通過限制性內切酶酶切載體獲得，或者用反向PCR擴增環狀載體獲得。插入片段由PCR擴增獲得，所用的兩條引物在5'端添加同源序列（圖中用多種顏色標記），最終使得多個片段能夠按照設定的順序組裝進同一載體。例如A片段左邊紅色序列為和載體同源的序列，右端綠色序列為和B同源的序列。五種不同顏色的同源序列之間互不相同以確保片段按照既定順序連接，避免產生錯誤連接。